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四环素对蓝藻藻毒素含量影响的定性研究(7)

时间:2016-11-30 22:31来源:毕业论文
蓝藻是由单细胞或许多细胞组成的群体或丝状体。蓝藻毒素大部分存在于细胞内部,当细胞破裂或衰老时就将毒素释放人水体中。蓝藻产生藻毒素的条件主


蓝藻是由单细胞或许多细胞组成的群体或丝状体。蓝藻毒素大部分存在于细胞内部,当细胞破裂或衰老时就将毒素释放人水体中。蓝藻产生藻毒素的条件主要包括:自然条件下释放藻毒素;受环境胁迫(如温度、PH、微量元素、有毒有害的化学物质等)释放藻毒素;受环境中污染物的影响释放藻毒素。
本实验中以蓝藻为研究对象,研究不同浓度的抗生素对蓝藻毒素含量的影响,探索四环素类抗生素水生环境的安全性。为四环素的合理使用,评价其生态风险,减少环境毒害提供理论依据。因此,选用淡水藻中的蓝藻为研究对象,探索四环素的水生环境的安全性具有重要的意义。
2.2 实验材料与方法
2.2.1 实验蓝藻的培养
本次实验中所用的藻类种源通过购买获得。蓝藻的培养过程包括:仪器的清洗、灭菌、干燥,培养液的制备,蓝藻的接种,蓝藻的培养四个步骤。
(1)仪器的清洗、灭菌、干燥
将玻璃仪器清洗干净后,放入立式蒸汽灭菌器中在121°C,0.1兆帕的条件下进行灭菌处理30分钟。灭菌结束后,待压力降为零后将仪器取出,放入电热鼓风干燥箱中在70°C的条件下进行干燥处理2小时。不耐高温的容器和工具,如塑料和橡胶制品等不能用加热法消毒,则将其放入75%的乙醇溶液中浸泡进行灭菌,实验之前将其取出用蒸馏水冲洗后,再用吸水纸吸干。
(2)培养液的制备
藻的培养液(液体培养基)是在纯净水中加入各种营养物质配制而成。本实验以普通铜绿微囊藻为研究对象,培养基为BG11培养基,培养基成分(配1000ml)如下:
NaNO3         1.5 g/L
K2HPO4        0.04 g/L
MgSO4•7H2O    0.075 g/L
CaCl2•2H2O     0.036 g/L
Citric acid(柠檬酸)    0.006 g/L
   Ferric ammonium citrate(柠檬酸铵盐)   0.006 g/L
EDTA Na2     0.005 g/L
Na2CO3       0.04 g/L
  A5 (Trace mental solution)   1mL/L :
H3BO3            2.86 g/L
MnCl2•4H2O      1.86 g/L
ZnSO4•7H2O      0.22 g/L
Na2MO4•7H2O     0.39 g/L
Co (NO3) 2•7H2O    0.05 g/L
CuSO4•5H2O       0.08 g/L
根据所需取上述营养物质加入纯净水,配制成所需的培养液。若其中的固体物质较难溶解,则需放入超声仪中进行超声。待固体完全溶解后,再进行灭菌处理,备用。
(3)藻类接种
培养液配好后进行接种培养。接种就是把藻原液接入新配好的培养液中。
1.藻原液的外观应颜色正常(深绿色)、无大量沉淀和无明显附壁现象。
2.接种前测定藻原液的吸光度,根据藻原液吸光度及实验所需的藻液吸光度确定藻原液的稀释倍数。
3.根据实验所需藻液体积,计算藻原液、培养液及储备液的量。
4.按照培养液,藻原液,储备液的顺序依次将三者加入50ml锥形瓶中。
5.藻液配好后,摇匀测定吸光度,记录开始养藻的时间(一般是上午11点)。
(4)培养
培养环境为SPX-GB-150光照培养箱。培养方法是用50ml锥形瓶,装20~30ml培养液,接种藻液使成淡绿色。四层纱布封口以防污染,温度为25±0.5°C,光照在3000~40001x连续静止培养。经48小时培养后的藻液变为黄色。
2.2.2 实验方案
实验开始时将藻原液接种于50ml锥形瓶中,接种后对其进行一定浓度梯度(0ppm、1ppm、2ppm、5ppm、10ppm)的四环素处理,每个浓度设置3个平行样[39],配置好的藻液总体积为30ml。然后,利用紫外可见分光光度计测定在680nm处的藻液吸光度。藻液经48小时培养后,再次测试藻液的吸光度,然后利用间接酶联免疫法测定藻液中藻毒素的含量。最终计算出每个试样中藻毒素的总量,单个释放的藻毒素的含量,分析误差棒,进而说明四环素对藻类释放藻毒素的影响及四环素的水生安全性。 四环素对蓝藻藻毒素含量影响的定性研究(7):http://www.751com.cn/yixue/lunwen_588.html
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