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四环素对蓝藻的急性毒性研究+实验讨论(11)

时间:2016-12-08 20:08来源:毕业论文
3.5.2 试剂配制 染色液:取考马斯亮蓝G-250 100 mg溶于50 mL 85%磷酸,加水稀释至一升。该染色液可保存数月,若不加水可长期保存,用前稀释。 标准蛋白溶液



3.5.2 试剂配制
染色液:取考马斯亮蓝G-250 100 mg溶于50 mL 85%磷酸,加水稀释至一升。该染色液可保存数月,若不加水可长期保存,用前稀释。
标准蛋白溶液:0.5 mg/mL牛血清蛋白。
位置浓度的蛋白质溶液用酪蛋白配制,浓度控制在10~30 mg/mL

3.5.3 实验方法
    取7支试管,按下表加入试剂,将试管摇匀,放置20 min。用分光光度计比色测定吸光值A595nm。以A595nm为纵坐标,标准蛋白质浓度为横坐标,绘制标准曲线。
表3-1 考马斯亮蓝测定蛋白质含量标准曲线
考马斯亮蓝测定蛋白质含量标准曲线
试管编号    0    1    2    3    4    5    6
0.5 mg/mL牛血清蛋白    0.0    0.1    0.2    0.4    0.6    0.8    1.0
蒸馏水    1.0    0.9    0.8    0.6    0.4    0.2    0.0
考马斯亮蓝    5.0    5.0    5.0    5.0    5.0    5.0    5.0
将10个100 mL三角烧瓶分别加入经稀释后的藻液。编号为1和2的两瓶藻样作为控制样参照。标号为3和4的,控制四环素浓度为1 mg/L;标号为5~7的,控制四环素浓度为5 mg/L;标号为8~10的,控制四环素浓度为10 mg/L。分别测定72、144小时吸光度。测定吸光度时,先从100 mL三角烧瓶中取出30 mL,移至烧杯,在细胞破碎仪下破碎10分钟(破碎3秒,停3秒),随后取经破碎的藻液于离心机下离心(3000r/m),取离心后上清液1 mL于10 mL试管中加入5 mL考马斯亮蓝,震荡均匀,并静置20分钟,随后在595 nm下测定吸光度。

3.6 高效液相色谱检测四环素在铜绿微囊藻液中的降解
3.6.1 实验原理
高效液相层析仪根据各种各样的化工互作用力来分离混合物。这种互作用力通常是分析物及分析管柱之间的一种非共价性质。使用高效液相色谱时,液体待检测物在不同的时间被注入色谱柱,通过压力在固定相中移动,由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同,不同的物质顺序离开色谱柱,通过检测器得到不同的峰信号,每个峰顶都代表一个另外化合物的种类,最后通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质。

3.6.2 实验特点
高效液相色谱法有“四高一广”的特点:
(1)高压:流动相为液体,流经色谱柱时,受到的阻力较大,为了能迅速通过色谱柱,必须对载液加高压。
(2)高速:分析速度快、载液流速快,较经典液体色谱法速度快得多,通常分析一个样品在15~30分钟,有些样品甚至在5分钟内即可完成,一般小于1小时。
(3)高效:分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果,比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。
(4)高灵敏度:紫外检测器可达0.01 ng,进样量在μL数量级。
(5)应用范围广:百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析,特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析,显示出优势。
本实验采用反向分配色谱法,使用C18色谱柱,采用15%:85%(乙腈(色谱纯):柠檬酸溶液pH约2.95)作为流动相。
图3-2 高效液相色谱法测定四环素在铜绿微囊藻中的降解实验
3.6.3 实验方法
    将15个100 mL三角烧瓶分别加入经稀释后的藻液,初始藻密度为1.41×106 个/mL。编号为1~3的3瓶藻样作为控制样参照,不添加抗生素;标号为4~6的,控制四环素浓度为1 mg/L;标号为7~9的,控制四环素浓度为2 mg/L;标号为10~12的,控制四环素浓度为5 mg/L;标号为13~15的,控制四环素浓度为10 mg/L。使用高效液相色谱仪分别测定0、24、48、72、96、120、144小时各藻样四环素的峰面积,绘制藻样中四环素在控制组和各浓度梯度下的降解曲线。 四环素对蓝藻的急性毒性研究+实验讨论(11):http://www.751com.cn/yixue/lunwen_762.html
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