为了克服P-ELISA较窄的线性范围的限制，我们结合噬菌体展示肽和CLEIA的优点，建立了具有高敏感性和更宽的线性范围的酶免疫分析。氯噻啉是一种广谱的新烟碱杀虫剂，对蜜蜂和其他授粉昆虫具有高毒性[22,23]并污染生态系统[24]。虽然基于仪器的检测方法，如高效液相色谱（HPLC）[25]和HPCL耦合到串联质谱（HPLC-MS/MS）[26-28]已成功用于氯噻啉的检测，但是仪器费用昂贵，大量样品检测时，耗时耗力。在以前的研究中，基于同源半抗原的ELISAs [29,30]和荧光偏振免疫测定法（FPIA）[31]，已应用于氯噻啉的检测，IC 50在58.2 ng mL-1至87.94 ng mL-1内。在此次研究中，我们从环7，环状8和线12噬菌体展示随机多肽库得到了751种能够特异性识别氯噻啉单克隆抗体的多肽序列，并建立了检测氯噻啉的P-ELISA和P-CLEIA。比较两种方法的敏感性和线性范围，并先前报道的同源免疫分析法进行比较[29-31]。通过HPLC分析实际样品验证了P-ELISA和P-CLEIA的准确性。
本研究旨在建立多种快速灵敏的氯噻啉残留免疫分析方法，进行研究和比较分析，并且应用于环境和农业样品中氯噻啉残留检测。可以为氯噻啉残留检测提供更加丰富、更加便捷的检测手段和技术储备。
1.材料与方法
1.1材料
除特殊说明外，所有试剂均为分析纯。氯噻啉标准品（97.82%）来自南通江山农药化工股份有限公司，其他农药标准品均从由Ehrenstorfer（德国）购买。交叉反应所用标准品均购买于Dr Ehrenstorfer GmbH公司（德国）。脱脂奶粉购买于Bio-Rad，对碘苯酚（PIP）购买于ACROS公司。3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）、异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-乳糖苷（Xgal）、鲁米诺、吐温-20均购买自Sigma公司，HRP标记的鼠源抗M13单克隆抗体和大肠杆菌ER2738菌株购买自GE Healthcare公司，线十二肽库和环七库购买自NEB公司。单克隆抗体[35]和环八肽[36]来自之前的研究。 氯噻啉噬菌体展示酶免疫分析方法的研究(3):http://www.751com.cn/yixue/lunwen_32187.html