3．2 发展趋势

近年来，随着转基因技术的发展，转基因的目标性和安全性日益受到重视，去除筛选标记、减少载体骨架整合、定点整合基因等技术已成为转基因技术研究的新热点，必对大豆遗传转化研究的发展产生重要影响。

3．2.1减少载体骨架整合率 

　　在某些情况下，T．DNA的转移和整合带有部分载体骨架序列。虽然可以通过侧翼序列分析的办法筛选出不含载体骨架的转化事件，但这会导致后期工作量大幅度增加。近几年，研究人员建立了骨架整合标签法[55]、骨架整合型抑制法[56]、R／Rs重组整合系统[57]以及农杆菌基因组T.DNA整合技术[58]等方法，可以降低载体骨架整合率，减少转基因后代筛选工作量。

3．2．2 外源基因的定点整合 

　　在农杆菌介导的植物转化中，外源基因通过非同源重组形式整合，具有相对随机性，难以预测基因位置效应对转基因植株目的基因表达和非目标性状的影响。当外源基因的插入位点导致自身基因沉默或破坏其它基因功能时，这一问题尤为突出。近年开发出重组位点介导定点整合技术和定点酶切介导定点整合技术，有助于提高转基因的目的性和可控性。在重组位点介导的定点整合中，最常用的是Cre／lox重组整合系统 ；在定点酶切系统中既有通过DSBs直接导入的方法 ，也有通过锌指核酸酶介导的定点整合技术 。

在未来一段时间内，随着转化效率的提高，无标记、无载体骨架、定点整合等技术及具有诱导性、发育期特异性和组织表达特异性的启动子[59]将广泛应用于农杆菌介导的大豆遗传转化，使大豆转基因育种进入一个全新的时代。

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