2.4.3 Mg2+对酶活的影响 8

2.4.4 Na+对酶活的影响 8

2.4.5 Ca2+对酶活的影响 9

2.4.6 KH2PO4对酶活的影响 9

3 讨论 10

参考文献 10

致谢 12

核酸酶是一类通过裂解连接相邻核苷酸之间的磷酸二酯键，来降解核酸分子的酶。以往研究表明，核酸酶在遗传机制和生产应用的不同方面起着重要的作用，其中核酸酶分解DNA和RNA得到的5-c核苷酸可以作为很多药品、化妆品的原材料，具有很高的应用价值。我国有丰富的核糖核酸（RNA)，但以往研究获得的核酸酶活力低下，专一性不强，这在很大程度上制约了核苷酸产业的发展。因此，获得专一性且活力高的核酸酶对核苷酸工业的发展具有重大意义。

基因工程大肠杆菌是基因工程生产的重要工具。以往研究表明，基因工程大肠杆菌可以作为基因的外在表达载体，大批量地表达和生产某种特定产物。如：干扰素，抗生素和蛋白酶等等。例如：黄皓等就通过基因工程大肠杆菌对菊酯类农药降解酶的发酵表达进行了优化，得到了酶活更高的农药降解酶，对农药污染具备一定的缓解作用。正是由于基因工程大肠杆菌这种特性，所以许多研究者利用基因工程大肠杆菌来获得专一性强且酶活力高的核酸酶，以期得到突破，促进核苷酸产业的发展[1]。

1 材料与方法

1.1实验材料

1.1.1菌种

Y.e.p基因工程大肠杆菌，由笔者实验室构建。它是将Y.e.p非特异性核酸酶基因连接在质粒上作为载体导入大肠杆菌中，从而形成基因工程大肠杆菌[2]。具体构建方法参看文献[3]。Y.e.p基因工程大肠杆菌发酵产生的核酸酶为非特异性核酸酶，非特异性核酸酶能够非特异性地降解几乎所有形式的核酸，能防止核酸污染，因而在工业生产中应用广泛[4-6]。

1.1.2种子培养基及其组分

LB培养基：酵母粉5 g/L， 蛋白胨10 g/L，氯化钠10 g/L，卡那霉素 0.1 %，若为固体培养基需加入10 g/L琼脂，固体液体培养基均加入1000ul的50mg/ml卡那霉素。

1.1.3发酵培养基及其组分

发酵培养基是在基本的LB培养基，酵母粉5g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠10g/L之上进行改造，改造后的培养基分别含有葡萄糖、蔗糖、氯化铵4g/L，8g/L，12g/L，20g/L，32g/L，甘油2g/L，4g/L，6g/L，10g/L，16g/L，氯化钾、氯化镁、氯化钙、氯化锰、氯化亚铁、磷酸二氢钾、氯化铜、硫酸锌0.4g/L，0.8g/L，1.2g/L，2.0g/L，3.2g/L。另外三种发酵培养基是改变LB培养基的成分，第一种是改变酵母粉的含量，只加入蛋白胨10g/L，氯化钠10g/L，然后含有酵母粉0g/L，4g/L，8g/L，12g/L，20g/L，32g/L。第二种是改变蛋白胨的成分，只加入酵母粉5g/L，氯化钠10g/L，然后含有蛋白胨0g/L，4g/L，8g/L，12g/L，20g/L，32g/L。第三种改变氯化钠的含量，只含有酵母粉5g/L，蛋白胨10g/L，然后含有氯化钠0g/L，4g/L，8g/L，12g/L，20g/L，32g/L，以上培养基均含卡那霉素1000ul/L，且以上发酵培养基的pH均为最适pH。

1.1.4试剂

    酵母粉、蛋白胨、葡萄糖、蔗糖、甘油、氯化铵、氯化钙、氯化镁、氯化钠、氯化锰、氯化亚铁、氯化铜、硫酸锌、磷酸二氢钾、MgCl2·6H2O 、DNA（-20℃保存）、Tris-HCl（pH6.8、1mol/L）、EDTA缓冲液、蒸馏水、1mol/L氢氧化钠、1mol/L盐酸、50mg/ml卡那霉素、IPTG。

1.1.5实验仪器

    pH计、玻璃棒、烧杯、试管、冰箱、试管塞、锥形瓶、移液枪、摇床、37℃培养箱、离心机、1.5ml EP管、标签纸、记号笔、温度计、电泳仪、磁力振动器、分光光度计、超净工作台。 基因工程大肠杆菌发酵生产核酸酶的发酵培养基优化(2):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_49912.html