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共轭亚油酸异构酶基因原核表达系统的构建(3)

时间:2020-05-02 09:12来源:毕业论文
1.2.2 抗炎症和抗癌功能及其生理机制 CLA最引人注目的生理功能便是抗癌作用。Pariza最先发现从烤牛肉中里提取的浓缩物可以抑制癌细胞的生成与扩散,而

1.2.2 抗炎症和抗癌功能及其生理机制

CLA最引人注目的生理功能便是抗癌作用。Pariza最先发现从烤牛肉中里提取的浓缩物可以抑制癌细胞的生成与扩散,而这种抑制作用有赖于浓缩物中CLA的含量[16]。随后研究中发现,CLA能有效减少炎症以及免疫刺激,但具体的作用机理还不能确定。Akahoshi的大鼠实验中,cis-9,trans-11-CLA能够抑制大鼠细胞的促炎因子肿瘤坏死因子α的释放 [17]。Loscher的小鼠实验表明, cis-9,trans-11-CLA能有效诱导产生细胞白介素并作用于树突状细胞使细胞内毒素失活 [18]。Wahle 等的研究显示trans-10,cis-12CLA能通过抑制细胞增殖从而降低小鼠乳腺癌细胞的生长 [19] [20]。综上所述,cis-9,trans-11-CLA和trans-10,cis-12CLA这两种共轭亚油酸异构体都有抗癌的生理活性,即使cis-9,trans-11-CLA和trans-10,cis-12CLA对抑制癌细胞生长与促使肿瘤细胞凋亡的具体生物机理不尽相同,但是对患肿瘤病人的改善都发挥出了非常积极的意义。NRC(1996)公布,通过实验动物证实,CLA是唯一具有抗癌作用的脂肪酸 [21] 。可见CLA在抗癌的功能上又为科学家们开辟了新的领域。

1.3共轭亚油酸的合成

常见的CLA的合成法有化学合成法、微生物合成法两大类。其中化学合成法可以实现传统的CLA大规模生产,然而得到的是CLA异构体的混合物,将混合物分离得到CLA异构体纯品的难度较大且副产物对生物体极易产生副作用;生物合成共轭亚油酸的单体应用于食品、医药行业中,则具有良好的安全性和稳定性,近年来也广泛被营养学家所接受。

1.3.1 CLA的化学法合成法

在CLA的化学合成法中有异构化法、脱水法、溴化法几大类。其中,碱性异构化法是相对经济的CLA合成法。但是碱性异构化法存在的最大问题是产品里包含了几种CLA异构体且难以分离。从上文中得知由于cis-9, trans-11CLA 与 trans-10两种异构体对人体生理功能的影响不同且难以将混合物中的多种异构体分离,因此在实际应用中,这种CLA的合成法的操作性不大。

 

1.3.2  CLA 生物合成法

人类在日常饮食中摄取共轭亚油酸的主要途径是反刍动物的乳、肉制品。目前已发现在反刍动物的乳、肉制品中,一些瘤胃菌氢化的中间产物十八碳烯酸能够将LA通过异构法转化成cis-9,trans-11 CLA[24]。

自然界里有三类已知的微生物可以把 LA 转化为 CLA,这三类微生物都是厌氧菌或兼性厌氧菌。分别是是以下三大类:丙酸杆菌、乳酸杆菌和瘤胃细菌。

根据生物催化合成机制,可以将生物催化法分成大致两类:单酶催化与复合酶催化。在LA 转化为 CLA 的生物过程中使用单一的一种酶催化作用即为单酶催化法,在LA 转化为 CLA 的生物过程中使用多种亚油酸异构酶共同催化的即为复合酶催化法。在目前的研究中,已知氨基酸序列且能够分离纯化的亚油酸异构酶有三种,分别是来源溶纤维丁酸弧菌[25]、罗伊氏乳酸杆菌[26]和痤疮丙酸杆菌[27]。溶纤维丁酸弧菌和罗伊氏乳酸杆菌均为诱导酶,也为膜结合酶,在纯化过程中是以细胞形式进行反应,极易失活、较不稳定,且具有底物抑制性,在生物转化法生产 CLA的实际操作应用中具有很强的限制性。

来源于痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)的亚油酸异构酶(PAI)作用于亚油酸分子的 C9 双键,产物为 trans-10,cis-12-CLA。PAI 是胞内可溶性蛋白,分子量大小为 48kDa,不受底物抑制。它是目前唯一已知晶体结构的亚油酸异构酶,也是唯一被成功异源表达的亚油酸异构酶。PAI 先后在大肠杆菌、酿酒酵母、烟草种子、大米及乳酸菌中成功进行了重组表达,具有很好应用潜力[28]。 共轭亚油酸异构酶基因原核表达系统的构建(3):http://www.751com.cn/shiping/lunwen_50822.html

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