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卤化酶单克隆发酵工艺优化(2)

时间:2018-10-23 10:29来源:毕业论文
1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌种来源 (1)海洋链霉菌编号H1-H10. (2)S.albus.J1074. 1.1.2 培养基 (1)MS液体培养基:大豆粉20g/L、D-甘露醇20g/L. (2)


1  材料与方法
1.1 材料
1.1.1  菌种来源
(1)海洋链霉菌编号H1-H10.
(2)S.albus.J1074.
1.1.2  培养基
(1)MS液体培养基:大豆粉20g/L、D-甘露醇20g/L.
(2)R5培养基(1L配方):蔗糖103g、硫酸钾0.25g、751水合氯化镁10.12g、葡萄糖10g、酪蛋氨基酸0.1g、Trace element solutions0.52ml、yeast extract5g、TES Buffer5.73g、蒸馏水1000ml.
(3)MS固体培养基:大豆粉20g/L、D-甘露醇20g/L、琼脂糖20g/L.
(4)ISP4(50ml配方):可溶性淀粉0.5g、磷酸氢二钾0.05g、硫酸镁0.05g、氯化钠0.05g、硫酸铵0.1g、碳酸钙0.1g、七水合硫酸亚铁1g/30ml取 2.745微升、氯化锰1g/50ml取3.925微升、硫酸锌1g/50ml取4.45微升
1 .1 . 3  主要仪器
(1)旋转蒸发仪
(2)HPLC高效液相分析仪
(3)摇床
(4)台式冷冻离心机
(5)电子天平
(6)30℃培养箱
(7)-86℃冰箱
(8)暗箱三用紫外线分析仪
(9)SW-CJ-1FD型超净工作台
1.2  方法
1. 2. 1  编号为ZF-1073的海洋菌菌株发酵优化实验
  按照MS培养基配方配制MS固体培养基,趁培养基还是液体时倒10个平板,待这10个平板冷却后,接种编号为ZF-1073的白色链霉菌菌液,并在每个平板中加入200微升安苄抗生素,于30℃培养箱作为种子培养一周。一周后用棉棒蘸取长好的平板上的孢子收集、过滤滤除体积较大的颗粒物和渣滓,并于将过滤好的菌液放置于台式冷冻离心机离心五分钟,取上清液装于干净的塑料管中,保存于-86℃冰箱中,用于第二天使用。第二天,根据培养基的碳源设置实验的三个变量,分别是R5培养基配方中蔗糖含量正常组、R5培养基配方中蔗糖含量加倍组、R5培养基配方中蔗糖含量减半组,配置好这三组的液体培养基并进行试验。于超净台中每个培养基接种氨苄抗生素,每个三角瓶加氨苄抗生素25微升,取前一天收集好的孢子菌液加入培养基中,每个三角瓶加50微升,将接种完的菌株放置于28℃摇床,摇床转速设置为228转,培养一个周,一周后取出每瓶培养基中的树脂,用甲醇清洗浸泡后将液体倒入旋转蒸发仪中,水浴锅温度设置为50摄氏度,待瓶中完全干燥后再次用甲醇润洗,将润洗后的液体通过过滤灭菌后放入HPLC高效液相分析仪中 卤化酶单克隆发酵工艺优化(2):http://www.751com.cn/shiping/lunwen_24767.html
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