1 材料方法

1.1 菌种

嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus Stearothermophilus）ATCC7953。

    青霉素标准品(中诺药业（石家庄）有限公司，产品批号016131242，160万单位），溴甲酚紫，酵母粉，牛肉膏，葡萄糖（AR）为国药试剂。

1.2 培养基文献综述

芽孢活化培养基：蛋白胨6.0 g，胰蛋白胨3.0 g，酵母粉3.0 g，牛肉粉1.5 g，MnSO4为0.001 g，CaCl2为0.16 g，水1000 mL。

检测培养基：牛肉膏2.5 g，葡萄糖10 g，酵母粉2 g，溴甲酚紫指示剂0.03 g，蒸馏水定容至1000 mL，pH 6.8～7.2。

产芽孢培养基[8]：蛋白胨6.0 g、胰蛋白胨3.0 g、酵母粉3.0 g、牛肉粉1.5 g、琼脂15 g、MnSO4为0.001 g、CaCl2为0.16 g、MgSO4为0.07 g、蒸馏水1000 mL。

1.3 菌液的制备

将嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢培养物，接种于无溴甲酚紫的检测培养基斜面上，60 ℃条件下活化培养2 h后，置于60 ℃下培养24 h，得嗜热脂肪芽孢杆菌营养细胞培养物。用0.9%的无菌生理盐水溶液洗涤，制成425 nm处OD值在2.0左右的菌悬液（此处最佳浓度的标准是：菌浓度在检测培养基上培养时与培养基颜色变化的最佳观测时间，即在最短时间内看到最明显的培养基颜色的变化）备用。来`自^751论*文-网www.751com.cn

1.4磷酸缓冲液的配制

磷酸盐缓冲液 (0. 1 mol/ L ,p H 8. 0)准确称取16. 73 g 无水磷酸氢二钾( K2 HPO4 ) 和0. 523 g无水磷酸二氢钾 (K H2PO4) ,加水溶解并稀释至 1 000 mL 。

1.5鸡蛋样品处理

样本采集：分别于农贸市场、超市、养殖场随机收集不同批次鸡蛋各10个，放在清洁袋中带回实验室， 0 ℃-4 ℃下保藏（不清洗），实验在3-5 d内完成。

抗生素标准溶液的制备: 准确称取青霉素标准品0.18 g磷酸缓冲液定容至100 ml，备用。用磷酸缓冲液将定容好的青霉素溶液稀释成 0.005、0.0055、0.006、 0.0065μg/mL 的标准溶液。

样品的制备：取样品无抗鸡蛋敲碎去壳，搅拌，取蛋清10 ml，加入30 ml含有不同浓度青霉素的水溶液，不断搅拌，保鲜膜密封口后置于沸水浴上加热 15 min（灭活蛋清溶菌酶），取出冷却至室温，再次搅拌，滴加百分之十的柠檬酸水溶液，调节pH为6.6，此为检测样品I。

取样品无抗鸡蛋敲碎去壳，搅拌，取蛋清10 ml，加入30 ml含有不同浓度青霉素的水溶液，不断搅拌，保鲜膜密封口后置于微波炉中加热2 min（灭活蛋清溶菌酶），取出冷却至室温，再次搅拌，滴加百分之十的柠檬酸水溶液，调节pH为6.6，此为检测样品II。

取样品无抗鸡蛋敲碎去壳，搅拌，取蛋清10 ml，加入30 ml含有不同浓度青霉素的磷酸缓冲液，不断搅拌，保鲜膜密封口后置于沸水浴上加热 15 min（灭活蛋清溶菌酶），取出冷却至室温，再次搅拌，滴加百分之十的柠檬酸水溶液，调节pH为6.6，此为检测样品III。