醋酸钾（58.8g）、醋酸（23ml）文献综述

②再在烧杯中加入100ml去离子水，用磁力搅拌器搅拌溶解。

③然后加入去离子水定容至200ml。

④高压蒸汽灭菌锅灭菌后，4 保存。

（8）溴化乙锭溶液 (EB:10 mg/mL)的制备方法

①首先称量溴化乙锭1g，加入到100ml的烧杯中。

②然后加入100ml的去离子水，用磁力搅拌器经过数小时充分搅拌，直到溴化乙锭完全溶解为止。

③最后将溶液用棕色瓶封装，因为溴化乙锭见光易分解。 

提醒：EB染液的工作浓度一般为0.5 /ml。

（9）1 TE Buffer的配制方法

①量取下列溶液，置于100mL烧杯中

      1M Tris-HCl Buffer(pH 8.0)        1ml

      0.5M EDTA(pH 8.0)              0.2ml

②向烧杯中加入98.8ml的去离子水，均匀混合。

③将溶液定容至100ml后，高温高压灭菌。

④室温保存

2.2  CaCl2法制备JM109感受态

（1）取大肠杆菌JM109冰上融解，平板划线。

（2）从LB平板上挑取新活化的单菌JM109接种于3ml的试管中，37 的恒温摇床中振荡培养12h。

（3）取400 的菌液接种于40mlLB液体培养基中，37 的恒温摇床中振荡培养3h至OD=0.3—0.4。

（4）将菌液转入10ml的离心管（4管），冰置10min（摇动）。

（5）保存至4 ,5000r/min离心5min，弃上清液。

（6）加1/2体积（第4步菌液体积，即5ml）0.1M预冷CaCl2，用枪吹打，冰置30min。

（7）保存至4 ,5000r/min离心9min，弃上清液。

（8）加1/10体积（同6）0.1M预冷CaCl2悬浮细胞。

（9）分装，200 感受态与100  30%的甘油混匀，在-80 下储存。

（10）检测，涂平板，在LB培养基中能生长，而在加抗生素的LB培养基中不能生长。

2.3  SDS碱裂解法制备质粒来!自~751论-文|网www.751com.cn

（1）培养液8000r/min，离心3min，弃上清液。

（2）加150  Solution Ⅰ漩涡混匀，转移至1.5ml的离心管。

（3）加150  Solution Ⅱ，翻转5—8次。

（4）加150  Solution Ⅲ，翻转5—8次。

（5）14000r/min，离心10min。

（6）取上清液，加900 的无水乙醇离心，14000r/min，离心6min。

（7）弃上清液，加800 的70%乙醇洗沉淀，14000r/min，离心1min。

（8）弃上清液，沉淀中多余的酒精用真空泵吸干。

（9）37 敞口烘干20—30min。

（10）加入60  RNase，37 水浴30min，消化RNA。