嗜酸菌（尤其是无机自养型细菌）在低品位矿生物沥滤回收贵重金属，原煤脱硫及环保等方面有巨大应用价值[7]。利用嗜酸菌将贫矿和尾矿中金属溶出并回收的方法称生物湿法冶金，在矿石日益贫杂和环境问题突出的今天，生物湿法冶金技术是金属元素提取和废物利用的有效方式。生物冶金技术是利用嗜酸微生物氧化分解矿石或精矿，以获得有用金属如铜、金和铀等。生物冶金技术在铜矿的的冶金中应用较为广泛，美国日本等国家也广泛的应用生物冶金法浸出铀矿，应用生物冶金技术对钴、镍、锌和钼等金属的提取方面获得了成功[8]。在环境保护方面，利用嗜酸微生物处理重金属，Cu，Zn，Ni，Cd等的去除率可达到 80 % 以上，而且处理成本比传统方法如无机酸溶解法要降低很多[9][10]，嗜酸菌还被广泛应用到重金属污染土壤的生物修复和耐热酶的提取等方面[1] [11] 。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品

    样品来自浙江附近海域海底淤泥。

1.1.2 培养基

（1）海水液体培养基

Solution A：

NaCl（22.79 g/L），Na2SO4（3.98 g/L），KCl（0.72 g/L），NH4Cl（0.27 g/L），Na2HPO4（47.2 mg/L），NaBr（83 mg/L），NaHCO3（31 mg/L），H3BO4 （27 mg/L），NaF（2.6 mg/L），MES（1.3 g /L），H2O（890 mL）。

Solution B：

MgCl2·6H2O（11.18 g/L），CaCl2·2H2O（1.46 g /L）， SrCl2·6H2O（24 mg/L），H2O（100 mL）。

Solution C： 

FeCl4·4H2O（0.02 g/L），H2O（100 mL）。

Solution A和Solution B中的固体成分溶于去离子水后进行常规高压灭菌（121 ，30min）。Solution C是将FeCl4·4H2O放在80摄氏度烘箱中半小时，将去离子水常规灭菌后混匀。按照溶液比例A：B：C=89：10：1混合配制成液体海水培养基。（pH值调到5.0。）

（2）海水固体培养基（加入1.5%的碳源）

在上述的海水液体培养基中加入2.85%琼脂，1.5%碳源（称取1.5 g的葡萄糖或甘露醇溶于100 mL的去离子水中）

（3）海水营养培养基（固体）

在海水液体培养基中加入2.85%琼脂（2.85g/L），0.2%胰蛋白胨（0.2g/L），0.1%酵母提取物（0.1g/L）制成海水固体培养基。

1.1.3 菌种保存液来!自~751论-文|网www.751com.cn

     即甘油—生理盐水保存液，体积分数为80%甘油的甘油生理盐水。甘油80mL，生理盐水20mL，搅拌均匀，常规高压灭菌（121 ，15-20min）

1.1.5提取DNA的试剂盒

本试剂盒分PartⅠ和PartⅡ两部分。

PartⅠ部分（-20 ：Proteinase K（20mg/ mL）1mL、Lsozyme （20mg/mL）* 1.25mL×2、RNase A（10mg/mL）500 。

*应尽量避免反复冻融，融化后请于4 长期保存。

PartⅡ（请于室温15-25 保存）：Buffer BS 28mL、Buffer GL * 12mL、Buffer GB* 12mL、Buffer WA* 28mL、Buffer WB **  24mL、Elution Buffer  14mL、Spin Columns 50支、Collection tubes 50支。