国内外许多学者都对产漆酶和纤维素酶的木腐真菌进行了更为细致的研究，通过实验，他们分别测定出了最适合漆酶和纤维素酶反应的温度、pH、以及无机离子对它们的影响。

1.3  研究目的及意义

多孔菌属木质腐生菌，具有降解木质纤维素的能力，本实验中采用的菌株是2014年8月采自江苏省溧阳市天目湖南山竹海翠谷庄园板栗林, 经过分离纯化后得到菌株的纯菌丝体，然后对该菌株进行分类鉴定和酶学研究，获得纤维素酶和漆酶酶活较高的菌株，通过测定这两种酶在一段时间内酶活性的变化，计算得出这两种酶的酶活，并分析实验现象的原因。

本实验为漆酶和纤维素酶产生菌种的开发和利用奠定基础，通过研究获得高酶活的菌株可以为之后研究出更好的降解木质纤维素的方法及条件做铺垫。

2 材料方法

2.1 材料

菌株：2014年8月，采自江苏省溧阳市天目湖南山竹海翠谷庄园板栗林, 经初步鉴定，为绯红密孔菌(pycnoporus )。

母种分离：在无菌条件下，用无菌水对采集的子实体进行洗涤，然后再用市售氯霉素滴眼液对其表面进行消毒，采用组织分离法，将菌种的子实体组织块接种到PDA固体培养基上，25℃条件下恒温培养，7d，得到母种。

2.2 培养基源]自=751^`论\文"网·www.751com.cn/

（1）母种分离培养基：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂15g，用蒸馏水定容为1000mL

（2）液体发酵培养基：土豆200g，葡萄糖20g，酵母膏5g，用蒸馏水定容为1000mL

2.3 仪器与试剂

仪器：XSZ-D2 1600× 倒置生物显微镜、T6新世纪紫外可见分光光度计、水浴锅

试剂：ABTS，3，5-二硝基水杨酸，酒石酸钾钠，无水亚硫酸钠，柠檬酸，重蒸酚，羧甲基纤维素钠，HAc，NaAc，上述试剂全部为分析纯国药试剂。

试剂配制：

0.5mmol/L ABTS溶液：准确称取0.0274gABTS，用蒸馏水定容至100mL，置于棕色瓶中，放入冰箱备用。

HAc-NaAc(pH4.5)缓冲溶液：1.8gNaAc，0.98mLHAc，用蒸馏水定容至100mL，用pH试纸校准其pH值，放入容量瓶中备用。

3，5-二硝基水杨酸显色液：称取10g 3，5-二硝基水杨酸，融入适量的蒸馏水中，再加入20g分析纯氢氧化钠，20g酒石酸钾钠，加蒸馏水500mL，升温溶解后加入0.5g无水亚硫酸钠，2g重蒸酚，加热搅拌，完全溶解后冷却，用蒸馏水定容至1000mL，放在棕色瓶中，存放在冰箱内一个星期后使用。

0.5%羧甲基纤维素钠溶液（简称CMC）：精确称取0.5gCMC于100mL小烧杯中，加入适量的0.05mol/L pH5.0的柠檬酸缓冲溶液，加热溶解后移入100mL容量瓶中并用柠檬酸缓冲溶液定容至100mL，溶解后呈胶状，静置过夜，使用前摇匀。

1000μg/mL葡萄糖标准溶液：准确称取干燥至恒重的葡萄糖100mg，加蒸馏水溶解后定容至100ml。 

2.4 子实体观察

采用徒手切片和子实体菌丝分离法，制做成临时装片，在显微镜100倍下观察。