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位点特异性重组系统与高安全性载体的构建(2)

时间:2020-10-02 15:19来源:毕业论文
2.1 载体的构建 (1)pBIL2 35S GFP载体的构建 用BglⅡ和EcoRⅠ酶切pZA 35S GFP,用BamHⅠ和EcoRⅠ酶切质粒pBILoxp2,反应体系(100l)如下: pBILoxp2 40 pZA 35S GFP 20 Bam

2.1 载体的构建

(1)pBIL2 35S GFP载体的构建

用BglⅡ和EcoRⅠ酶切pZA 35S GFP,用BamHⅠ和EcoRⅠ酶切质粒pBILoxp2,反应体系(100μl)如下:

pBILoxp2      40                         pZA 35S GFP    20

BamHⅠ       2                            BglⅡ        2.5

EcoRⅠ        2                            EcoRⅠ       2.5

EcoRⅠButter  10                        EcoRⅠ Butter   10

BSA           1                            BSA           1

H2O           45                            H2O          64

在37℃温浴3小时,用PCR产物纯化试剂盒进行纯化,最后用22μl的去离子水洗脱,加入2.5μl的T4 DNA连接酶buffer和0.5μl T4 DNA连接酶,22℃连接2~3小时,

位点特异性重组系统与高安全性载体的构建(2):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_62190.html
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