本实验通过对桃树枝中所含内生菌进行分离纯化，并对内生菌发酵代谢产物进行高效液相色谱分析，从而初步判断内生菌是否产生与宿主植物相同的代谢产物，为桃树的栽培保护和开发提供一些有益的参考。

2  材料与方法

2.1 材料与试剂

2.1.1 实验材料

新鲜桃树的枝，采自淮阴师范学院4#学生宿舍、传达室附近。

2.1.2 培养基

分离纯化桃树体内内生菌的培养基为马铃薯葡萄糖培养基（PDA培养基）：马铃薯200 g(去皮切块煮碎过滤)，琼脂20 g，葡萄糖20 g，蒸馏水1000 ml，自然PH值。提取桃树体内内生菌代谢产物培养基为马铃薯葡萄糖液体培养基。

2.2  主要设备仪器源'自:751`!论~文'网www.751com.cn

电子天平，赛多利斯（北京）有限公司；BCD-207H型海尔冰箱；SW-CJ-ID型生物洁净工作台，苏州进化设备有限公司；MP-250B型霉菌培养箱，上海福马设备有限公司；HZQ-Q型全温振荡器，中国·哈尔滨市东联电子技术开发有限公司；RE-3000旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；HH-8数显恒温水浴锅，江苏金坛市亿通电子有限公司；SHB-III循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；低温冷却循环泵，郑州长城科工贸有限公司；inifinte1260高效液相色谱（配备G1311A四元泵、G1315B紫外检测器、G1313A自动进样器、G1379A柱温箱、部分收集器和Chemstation工作站），美国Agilent公司。

2.3  实验方法

2.3.1  桃树内生菌的分离、纯化及保存

将采来的新鲜桃树的粗壮枝叶剪掉，尽量除去表面附着物，分别放在水龙头下冲洗干净，把的桃树的枝切成若干小段，并用滤纸吸干水分，然后在超净工作台中，进行表面消毒处理：用无菌镊子取出，用75%酒精浸泡枝5 min，无菌水冲洗1次，然后用0.1%升汞分别浸泡2 min，最后用无菌水冲洗3次。用无菌镊子挑取枝放在无菌培养皿中，用无菌手术刀将其表皮剥离，纵切表皮取其中间的部分，然后将其切成1 cm大小，并从中间切开，顺序摆放到PDA培养基上［5］。

将接种后的培养皿放在28℃恒温箱中培养3-5天。观察桃树枝切片周围有无菌落形成，在超净工作台中无菌接种环挑取菌株划线分离培养，连续转接三次，纯化桃树内生菌；最后将纯化好的菌种接种到PDA斜面培养试管上保存在-4℃冰箱中备用。

对照实验：将上述材料经最后一次无菌水涂布在PDA培养基表面。培养条件跟上述相同，如材料周围未长出任何菌株，则证明所分离的菌株为桃树的内生菌。

2.3.2  内生菌发酵液及植物提取物的制备

内生菌发酵液的制备。在250 ml三角瓶中装150 ml液体PDA培养基，将培养基上的纯种菌株分别在培养皿中活化后接种到各液体培养基中，转速200r/min，培养温度28℃，摇床培养，培养5-7天。