两栖类动物在食物链中具有水陆两栖的独特地位,其生活周期比较复杂,幼体生长速度快,卵,鳃和皮肤具有渗透性,污染物能在其体内富集.这些特性使其成为监测环境污染的前哨物种.在环境毒理学研究中发挥着越来越重要的作用[1].其中，非洲爪蟾作为模式动物，拥有易于饲养和繁殖，世代周期短，子代多，易于遗传操作，其蝌蚪以及成体均生活在水中，可以很容易的吸收水体中外源性激素或其他化合物等特点[2]。从20世纪50年代以来，非洲爪蟾已经成为发育生物学的良好模型，在胚胎诱导[3]、血细胞发育[4]和形态发生[5]等研究领域的重要模式生物。非洲爪蟾个体早期发育主要经过卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、轴胚形成等阶段。爪蟾从受精卵到胚胎的发育过程也已经非常清楚，受精卵经过快速细胞增殖形成囊胚，随后进入原肠期，形成不同的胚层和体轴，然后神经板开始形成神经管，细胞进一步区域化以形成相应的器官原基[6]。这些研究结果为研究化合物对爪蟾生长发育影响的过程及机制提供了充分的条件。

目前，已知DGA对于苯中毒是有治疗效果的，而对二甲苯（PX）作为苯的衍生物，其毒性是否可被DGA拯救（rescue）源^自·751|文\论]文'网[www.751com.cn，目前尚不明确。本项目围绕DGA展开研究，为揭示受PX污染的蝌蚪在DGA培养下的生理变化。通过葡萄糖醛酸内酯（DGA）对于被对二甲苯（PX）污染的蝌蚪的相关实验，明确DGA对于被PX污染的蝌蚪是否有拯救（rescue）作用；明确DGA对被PX污染的蝌蚪的行为学和蛋白表达情况的作用。

1 材料与方法源^自·751|文\论]文'网[www.751com.cn

1.1  实验材料 

1.1.1 非洲爪蟾

雌雄成年非洲爪蟾来自美国NASCO公司，饲养在去氯自来水的爪蟾养殖系统内，水温大约在22℃左右，明暗光照周期为12h:12h，每周喂1次猪心和1次合成饲料。将其子代蝌蚪培养至34-47期，以此作为实验材料。

1.1.2 实验试剂

  PX母液（400μl PX+400ml ddH2O）；葡萄糖醛酸内酯（D-G-A）溶液（5g DGA+500ml ddH2O）；蝌蚪培养液（St）

1.2  培养方法

1.2.1 PX梯度污染试验

将34-47期的蝌蚪培养在培养皿中，培养液为160ml体积的PX溶液，每24小时换液，并记录存活量。其PX溶液浓度梯度为：

（1）0μl/ml（0 ml PX +160 ml St）；

（2）1μl/ml（20 ml PX +140 ml St）；

（3）2μl/ml（40 ml PX +120 ml St）；

（4）2.5μl/ml（50 ml PX +110 ml St）。

1.2.2 PX污染

将34-47期的蝌蚪培养在培养皿中，培养液为160ml体积的2μl/ml的PX溶液（40ml PX+120ml），每24小时换液，培养72小时。并记录存活量。

1.2.3 DGA（葡萄糖醛酸内酯）拯救

将PX污染72小时的蝌蚪培养在培养皿中，培养液为160ml体积的DGA溶液，每24小时换液，并记录存活量。其DGA溶液浓度梯度为：

（1）0mg/ml（0 ml DGA +160 ml St）；

（2）1mg/ml（16 ml DGA +144 ml St）；

（3）2mg/ml（32 ml DGA +128 ml St）；

（4）3mg/ml（48 ml DGA +112 ml St）。