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氢气对菲处理下甘薯叶片相关基因表达量的影响(2)

时间:2020-06-13 11:30来源:毕业论文
2.实验步骤 2.1 实验材料: 徐薯 22大小形态相似的叶片 2.2 植物培养与处理: 挑选大小合适、形态健康的徐薯 22的叶片 40片,分四组,每组个十片叶片;菲溶


 2.实验步骤  2.1 实验材料: 徐薯 22大小形态相似的叶片 2.2 植物培养与处理: 挑选大小合适、形态健康的徐薯 22的叶片 40片,分四组,每组个十片叶片;菲溶液的配置:称取 0.2g菲于小烧杯中,加入 50mL丙酮溶液混合溶解,保存待用;配置 2L Knop 溶液,将 PH调至5.8,取四个烧杯并做好标记(1、 2、 3、 4),向四个烧杯中各加入 400 mL,Knop 溶液,将第一个烧杯中的溶液均分到有徐薯22叶片的十个培养皿中,盖好盖并做好标记(CK),放入培养箱中培养;向第二个烧杯中加入2mL的菲溶液,混匀,并将其均分到有徐薯 22叶片的十个培养皿中,盖好盖并做好标记(PHE),放入培养箱中培养;将第三个烧杯中的溶液均分成两份,其中一份通氢气 45分钟,另一份加入 1mL的菲溶液,将处理好的两份溶液又重新混合在一起,混匀,将其均分到有徐薯 22叶片的十个培养皿中,盖好盖并做好标记(PHE+H2),放入培养箱中培养;将第四个烧杯中的溶液通氢气1小时后,将其均分到有徐薯22叶片的十个培养皿中,盖好盖并做好标记(H2) ,放入培养箱中培养。24小时后换液及滤纸,连续培养 6天后保存样品。 Knop溶液配方: 药品  硝酸钙  硫酸镁  硝酸钾  磷酸二氢钾 氯化铵  铁盐(200x) 质量(g)   0.4g  0.1g  0.1g  0.1g  0.1g  2.5mL 加超纯水至 1L。
2.3 样品保存 将四种处理的叶片用超纯水漂洗干净之后,用铝箔将其包好并做好标记,分装并于-80℃的冰箱中保存。 2.4 提取 RNA   称取约0.1 g的甘薯根组织,液氮研磨成粉末,然后加入1 mL的Trizol试剂,盖紧盖子,充分剧烈振荡 15 s,于室温静置 5min,4 ℃  12000 rpm 离心 10min。之后加入1mL氯仿,振荡后于 4 ℃  12000 rpm 离心10 min。离心后样品发生分


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