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采用木糖生物转化天然香料2-苯乙醇的工艺研究(5)

时间:2017-01-09 14:28来源:毕业论文
2.实验物品与方法 2.1主要原料与试剂 原料及试剂 型号 厂家 木糖 L-苯丙氨酸 食品级 无锡晶海氨基酸有限公司 MgSO4 A.R. 上海统亚化工科技发展有限公司 K



2.实验物品与方法
2.1主要原料与试剂
原料及试剂    型号    厂家
木糖        
L-苯丙氨酸    食品级    无锡晶海氨基酸有限公司
MgSO4    A.R.    上海统亚化工科技发展有限公司
K2HPO4    A.R.    上海精化科技研究所
KH2PO4     A.R.    上海精化科技研究所
NaCl    A.R.    上海精化科技研究所
DNS试剂    C.P    实验室配制

2.2主要仪器
仪器    型号    厂家
电子天平    JA2103N    上海民桥精密科学仪器厂
恒温摇瓶柜    DHZ-D    江苏太仓市实验设备厂
电热恒温干燥箱    DHG-9245A    上海一恒科技有限公司
  电子灭菌锅    BIOFIO 100    NEW BRONSWICK SCIENTIFIC
台式离心机    TGL-5    上海安亭科学仪器厂
超净工作台    SA-900-1JE    上海稼丰园艺用品有限公司
紫外分光光度计    752型    上海光谱仪器有限公司
气相色谱仪    6890A     美国安捷伦科技有限公司
高效液相色谱仪    1260    美国安捷伦科技有限公司

2.3菌种
即发活性干酵母:本实验室保藏
2.4生物转化培养基
木糖 10g/L, MgSO4  5g/L,KH2PO4 5g/L,NaCl 1g/L,L-苯丙氨酸 10g/L,自然PH,装液量50mL/250mL ,8层纱布扎口,高压蒸汽121℃灭菌15min(苯丙氨酸单独通过过滤灭菌)。

2.5实验方法
2.5.1菌种筛选
用转化培养基对5种酿酒酵母菌株转化合成2-苯乙醇的能力进行比较,以筛选转化合成2-苯乙醇浓度较高的菌株。将活性干酵母加入灭菌后的转化培养基后,于28℃、220r/min的恒温振荡摇床中转化48小时。转化培养结束,测定2-苯乙醇的浓度。每种酵母转化培养设置3个重复。

2.5.2单因素实验
实验研究木糖浓度、L-苯丙氨酸浓度、MgSO4浓度、KH2PO4 浓度、NaCl浓度、温度、PH、装液量等8个因素对生物转化天然香料2-苯乙醇产率的影响,确定显著因素和因素变化范围。各因素水平设置如下:木糖2,6,10,20,30g/L;L-苯丙氨酸2,6,10,20,30g/L;MgSO4  2,3,4,5,6,7g/L;KH2PO4  2,5,8,11,15g/L;NaCL 0.1,0.5,1,2,3g/L;温度20,25,28,32,35℃;PH=5,6,6.5,7,8;装液量50mL/250mL,75mL/250mL,100mL/250mL,125mL/250mL,150mL/250mL。
取灭菌后的转化培养基,在无菌室中每瓶各加入对应浓度的活性干酵母和L-苯丙氨酸,最后放入28℃,220r/min恒温摇瓶柜中发酵培养48小时。样品在3000r/min下离心5min,取上清液,通过DNS法测定发酵液中木糖含量,用液相色谱法分析样品中的2-苯乙醇浓度和L-苯丙氨酸浓度,用气相色谱法分析样品中的2-苯乙醇浓度和乙醇浓度。

2.5.3响应面实验
在单因素的基础上,确定了对响应值具有重要影响的因子后,采用Box-Behnken 试验设计方法,对生物转化天然香料2-苯乙醇影响因素进行更为深入的研究和条件优化,考察2-苯乙醇转化浓度与培养基主要成分之间和培养条件的关系,旨在建立它们之间的回归方程模型,做出响应面图,并对模型进行分析,确定最佳培养基组成及培养条件。

2.6分析方法
2.6.1 液相色谱法分析发酵液中的2-苯乙醇浓度和L-苯丙氨酸浓度 采用木糖生物转化天然香料2-苯乙醇的工艺研究(5):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_2044.html
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