为了开发有效的吸附材料，让生物催化剂在制备工业得以使用，开发高效的可再生的酶吸附固定材料迫在眉睫，因而研究资源丰富的天然物，特别是可再生的天然废弃物进行加工，制备固定化酶载体材料，将对充分利用自然资源、进行可持续发展具有十分重要的经济价值。

在南方地区大量种植且是我国的主要水果之一—柚子(Citrus maxima)的可食率在46%—56%[9]。一般情况，柚子皮会未被利用而丢弃，一方面造成了浪费，另一方面污染环境，给社会带来了负面影响。如果这些柚子皮能被利用起来当作载体材料吸附剂，这对废物的再利用具有重要意义。

本文以柚子皮为原料制备吸附剂材料，以中性蛋白酶为吸附质，考察吸附时间、吸附温度、吸附质初始浓度为影响因素的基础上,重点研究吸附酶对蛋白质水解性能,以确定柚子皮制备材料作为酶固定剂的可行性，这一研究旨在为柚子皮的科学利用提供参考据。

2  实验部分

2.1  化学药品和吸附材料

表1. 化学药品

药品名称 规格 生产厂家

考马斯亮蓝G-250 AR 上海浩然生物技术有限公司

乙醇 AR

磷酸(85%) AR

中性蛋白酶 AR 上海实意化学试剂有限公司

牛血清蛋白 AR 国药集团化学试剂有限公司

柚子皮吸附材料 AR

2.2  仪器设备

表2. 实验仪器

仪器名称 生产单位

水浴恒温振荡器 常州国华仪器有限公司

UV751GD紫外可见分光光度计 上海欣益仪器仪表有限公司

GZX—9146MBE数显鼓风干燥箱 上海博迅有限公司医疗设备厂

精密试纸 上海三爱思试剂有限公司（原上海试剂厂）

电子天平 北京赛多利斯仪器系统有限公司

2.3  柚子皮吸附材料

来源：本实验所使用的柚子皮吸附材料来自淮阴师范学院化学化工学院1006班沈茜茜和徐慧同学的实验成品。

方法：将柚子内皮放入沸水中，煮沸，至相邻几次的水溶液颜色不变，抽滤，然后置于100℃烘箱中烘干24h得样品P1，将P1粉碎，随即筛分到粒径大小为500μm,置于干燥容器中储存备用。

2.4  试剂配制

准确称取50 mg考马斯亮蓝G-250，溶于25ml 90%的乙醇中、加入85%（W%）的磷酸50ml,最后用去离子水定容到500ml。此溶液在常温下可放置一个月。

准确称取2.500g分析纯的中兴蛋白酶固体粉末，溶于250ml的容量瓶中，加去离子水至刻度线，摇匀，静置，得到0.010g/ml分析纯的中性蛋白酶溶液，使用时再按准确比例稀释成相应浓度的溶液。

准确称取100mg牛血清蛋白，溶于100ml去离子水中，得到1000μg/ml的原液。

除非另有说明，所有其他化学品都是分析纯的。